固体培养基培养花粉实验

1.花药离体培养实验的步骤,注意事项

步骤:①把花粉发育到一定阶段的花药,通过无菌操作技术,接种在人工培养基上进行离体培养;②花粉在培养基所提供的特定条件下可以发生多次分裂,形成类似胚胎的构造(胚状体)或愈伤组织;③诱导愈伤组织分化出芽和根,最后长成植株 取材:一般是离体培养花粉处于单核时期(小孢子)的花药.通过培养使它离开正常的发育途径(即形成成熟花粉最后产生精子的途径)而分化成为单倍体植株 结论:植物细胞的全能性 注意事项:必须注意整个操作过程中不应使花药受到损伤,若受到损伤,则应淘汰,因为损伤常常会刺激花粉壁形成二倍体的愈伤组织.。

2.求组培用培养花粉的培养基的配方

一种裸子植物花粉的离体培养方法及其专用培养基。该培养基配方为:蔗糖120-150g,硼酸0.1-0.2g,氯化钙0.1-0.3g,用水定容至1000ml。培养方法是将裸子植物花粉在室温下水合20-30分钟后,置于所述培养基中培养16-72小时,花粉萌发,得到花粉管。本发明的培养基为花粉的萌发和生长提供必需的环境条件。用本发明的方法进行裸子植物花粉的离体培养,不仅快速、简单易行,而且培养效果好,可获得大量具有生活力的裸子植物花粉管,具有较大的实际应用价值。

下面是植物组培的一般培养基配制:

配制培养基的具体操作

①根据配方要求,用量筒或移液管从每种母液中分别取出所需的用量,放入同一烧杯中,并用粗天平称取蔗糖、琼脂放在一边备用。

②将①中称好的琼脂加蒸馏水300~400毫升,加热并不断搅拌,直至煮沸溶解呈透明状,再停止加热。

③将①中所取的各种物质(包括蔗糖),加入煮好的琼脂中,再加水至1000毫升,搅拌均匀,配成培养基。

④用1N的氢氧化钠或盐酸,滴入③中的培养基里,每次只滴几滴,滴后搅拌均匀,并用pH试纸测其pH值,直到将培养基的pH值调到5.8。

⑤将配好的培养基,用漏斗分装到三角瓶(或试管)中,并用棉塞塞紧瓶口,瓶壁写上号码。瓶中培养基的量约为容量的1/4或1/5。

培养基的成分比较复杂,为避免配制时忙乱而将一些成分漏掉,可以准备一份配制培养基的成分单,将培养基的全部成分和用量填写清楚。配制时,按表列内容顺序,按项按量称取,就不会出现差错。成分单的格式与内容见表9-2。

3.培养基的灭菌与保存

培养基配制完毕后,应立即灭菌。培养基通常应在高压蒸汽灭菌锅内,在汽相120℃条件下,灭菌20分钟。如果没有高压蒸汽灭菌锅,也可采用间歇灭菌法进行灭菌,即将培养基煮沸10分钟,24小时后再煮沸20分钟,如此连续灭菌三次,即可达到完全灭菌的目的。

经过灭菌的培养基应置于10℃下保存,特别是含有生长调节物质的培养基,在4~5℃低温下保存要更好些。含吲哚乙酸或赤霉素的培养基,要在配制后的一周内使用完,其它培养基最多也不应超过一个月。在多数情况下,应在消毒后两周内用完。

3.硼对花粉管萌发的影响的实验

(1)实验目的:探索硼元素对花粉管萌发情况的影响(2)

(2)实验原理:_硼能够促进花粉的萌发和花粉管的伸长

(3)实验器材:新鲜葱兰花、恒温箱、葡萄糖溶液、琼脂、硼酸溶液、稀盐酸、蒸馏水、滴管、镊子、载玻片、显微镜等。

(4)实验步骤:

①用蔗糖和蒸馏水等配制两组培养液,实验组中加入硼酸(保持适宜的pH),对照组加入等量蒸馏水(加入少量稀盐酸以调节pH,使之与实验组pH一致)

②将花粉洒落在两组培养液面上悬浮培养,切忌猛烈晃动,以免花粉下沉在蔗糖溶液中,影响萌发,把培养液放在适宜的温度、充足的氧气等环境中培养

③一段时间后,取出花粉用显微镜观察并比较萌发情况

(实验中,也可加适量琼脂配制成固体培养基)

(5)实验预测及结论:

①两组培养液中花粉管长度相差不大,说明硼对花粉的萌发没有影响

②实验组花粉萌发状况良好,而对照组花粉不萌发或很少萌发,说明硼对花粉的萌发有促进作用

③实验组花粉不萌发,而对照组花粉萌发并长出花粉管,说明硼对花粉的萌发有抑制作用

另外有这样一道题目,你可以参考一下:

被子植物花粉管的萌发及其效果,一般与①温度、②促进物、③氧气等条件有关,请任意选择其中一项作为研究课题,并在提供的实验器材中选取合理器材进行实验,完成下面的实验报告。

(1)实验目的:____________________________________。

(2)实验原理:____________________________________。

(3)实验器材:新鲜葱兰花、恒温箱、葡萄糖溶液、琼脂、硼酸溶液、稀盐酸、蒸馏水、滴管、镊子、载玻片、显微镜等。

(4)实验步骤:____________________________________。

(5)实验现象:____________________________________。

(6)实验结果:____________________________________。

选①温度:(1)探索不同温度条件下花粉管萌发情况 (2)花粉管萌发需要适宜的温度,不同温度条件下花粉管萌发的长度不同 (4)利用葡萄糖、琼脂和蒸馏水等配制固体培养基(不加琼脂也可);设置5组实验,将花粉洒落在培养基上。分别放置于10℃、20℃、30℃、40℃、50℃的恒温箱中;数小时后在显微镜下观察比较花粉管的长度 (5)置于30℃、40℃的花粉管长度较长 (6)30℃、40℃为葱兰花花粉管萌发的适宜温度

选②促进物:(1)探索硼元素对花粉管萌发情况的影响(2)硼能够促进花粉的萌发和花粉管的伸长 (4)配制两组培养基,一组中加入硼酸,另一组中加入等量盐酸;将花粉洒落在两组培养基上;数小时后观察比较花粉的长度 (5)硼酸的一组花粉管长度较长 (6)硼酸能促进花粉的萌发和花粉管的伸长

选③氧气:(1)探索氧气对花粉管萌发情况的影响 (2)花粉的萌发和花粉管的伸长需要有一定浓度的氧气,无氧条件下花粉代谢受到抑制,必然影响花粉萌发 (4)配制两组培养基——固体培养基和液体培养基,将花粉撒落在两组培养基上,并轻轻震荡,使液体培养基上的花粉沉降到液面下;数小时后观察比较花粉管的长度 (5)固体培养基上的花粉管较长 (6)有氧条件下花粉萌发较快

提示:本题的实验设计较为开放,只要设计合理,符合实验的科学性、可操作性、单一变量可重复性等实验设计的原则即可。另外实验结果与实验现象要求一致。

4.高一生物实验题,望高人指点

第一题:

2)完全 等量的分别缺乏N、P、K

3)长势相同

4)四株幼苗的生长状况并作记录

与1号幼苗生长状况比较,2,3,4号幼苗生长状况均不正常

第二题:

(1)实验目的:探索硼元素对花粉管萌发情况的影响

(2)实验步骤:

①用等量葡萄糖和蒸馏水等配制两组培养液,实验组中加入硼酸(保持适宜的pH),对照组加入等量蒸馏水(加入少量稀盐酸以调节pH,使之与实验组pH一致)

②将花粉洒落在两组培养液面上悬浮培养,切忌猛烈晃动,以免花粉下沉在葡萄糖溶液中,影响萌发,把培养液放在适宜的温度、充足的氧气等环境中培养

③一段时间后,取出花粉用显微镜观察并比较萌发情况

(实验中,也可加适量琼脂配制成固体培养基)

(3)实验预测及结论:

①两组培养液中花粉管长度相差不大,说明硼对花粉的萌发没有影响

②实验组花粉萌发状况良好,而对照组花粉不萌发或很少萌发,说明硼对花粉的萌发有促进作用

③实验组花粉不萌发,而对照组花粉萌发并长出花粉管,说明硼对花粉的萌发有抑制作用

5.MS固体培养基的制作流程

一、实验所需的仪器设备和用具.二、实验安排与要求:将全班若干小组(6-7人),每小组配制500 mlMS固体培养基,三、边示范边讲解实验方法和步骤1、计算并填写培养基成分单计算公式:∨母液=∨配制÷母液倍数∨激素=∨配制*培养基中所要求的激素浓度÷激素母液浓度2.每组取500ml的烧杯一只,加300ml蒸馏水,用天平称4g琼脂放入蒸馏水中,在电炉上加热溶解.称15g蔗糖放入溶解的琼脂中.3.按配方取出各种母液,放入到溶解后的琼脂和蔗糖溶液中,用玻璃棒搅动混合,并加蒸馏水定容至500ml.4.用1mol/L的NaOH或1mol/LHCL将PH值调至5.8,可用PH精密试纸或酸度计测定.5.用培养基分装用具将500ml的培养基分注于15个所选用的培养瓶中.6.用封口膜、棉塞或其它封口物包扎瓶口,并做好标记.7.把分装好的培养基及所需灭菌的各种用具、蒸馏水等,放入高压灭菌锅的消毒桶内,将外层锅内加水至水位线.盖好锅盖,上好螺丝,接通电源升温.待锅内温度达100.C(0.05kgf/cm2或0.005MPa)左右时,打开排气阀排净锅内冷空气,然后关闭排气阀,继续加热至温度达到121.C(1.05kgf/cm2或0.103MPa)时,维持20~30min即可切断电源,让锅内气压自然下降,当压力降到零点后,打开排气阀,排出剩余蒸汽,再打开锅盖取出培养基及灭菌物品.8.培养基及灭菌物品在室温下自然冷却后,存放于阴凉干燥洁净处待用.四、总结高压蒸汽灭菌的原理和一般操作步骤实验。

固体培养基培养花粉实验

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